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固定细胞观察染色体的两种试剂-卡诺氏液与解离液  

2015-12-17 10:45:02|  分类: 默认分类 |  标签: |举报 |字号 订阅

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一、解离液

【作用】常用于根尖等细胞的涂片,它能使细胞壁中层(果胶质)溶解,而使细胞分开。

【配方】酒精(体积分数95%) 1份,浓盐酸(质量分数15%) 1 份,二者混合即成。

盐酸水解时间对染色效果影响很大,水解时间短,易着色但较难压片;水解时间长,染色慢而色淡;超过20min或水解温度过高,往往染色极淡,或染不上色。各种材料最合适的时间有差别,一般来说,大染色体材料水解时间可较长,小染色体材料宜短。

解离就是用要药液使组织的细胞相互分离开来,便于最后制片时能被压成一薄层进行显微观察。解离液中酒精的作用是迅速杀死细胞,固定细胞的分裂相(将洋葱根尖剪下后,如果不立即投入固定液中将其杀死并令其各种细胞结构凝固,那么,整个根尖将一个分裂期细胞也找不到!);而盐酸能溶解果胶,从而使洋葱细胞的细胞壁软化,并使细胞间的中胶层物质溶解,从而达到分离细胞的目的。另外解离时间不宜过短,否则根尖未充分解离,压片时细胞分不开;但又不能太长,否则使根尖过分酥软,无法进行漂洗和染色,且染色体成分被破坏。这一步是实验成功与否的关键

漂洗的目的是去除根中多余的解离液,特别是盐酸,防止解离过度,破坏染色体结构。(注:不是因为染色时用的是碱性染料龙胆紫,酸与碱发生反应会影响染色效果,龙胆紫溶液呈酸性,而碱性染料是根据染料物质中助色基团电离后所带的电荷来决定。一般来说,助色基团带正电荷的染色剂为碱性染色剂,反之则为酸性染色剂。)

但观察动物细胞有丝分裂中,不能用盐酸和酒精来“解离”动物组织。动物细胞不分散的原因是细胞膜上的某些蛋白质分子嵌入到相邻细胞的细胞膜内,有的还形成凹凸式镶嵌结构。盐酸和酒精都不能破坏这两种结构,因此无法用盐酸和酒精来“解离”动物组织。只能用胰蛋白酶,对于植物细胞,胰蛋白酶也没法发挥作用。

整理:王春强(莒县一中)

二、卡诺氏液

【作用】卡诺氏固定液适用于一般植物组织和细胞的固定,常用于根尖,花药压片及子房石蜡切片等.有极快的渗透力,根尖材料固定15—20min即可,花药则需1h左右,此液固定最多不超过24h,固定后用95%酒精冲洗至不含冰醋酸为止;如果材料不马上用,需转入70%酒精中保存.固定液的重要特性是能迅速穿透细胞,将其固定并维持染色体结构的完整性,还要能够增强染色体的嗜碱性,达到优良染色效果。

【配方】无水酒精3:冰醋酸1或无水乙醇6份,氯仿3份,冰醋酸(乙酸)1份。

卡诺氏固定液主要是固定细胞形态并维持染色体结构的完整性,还能提高染色效果,但是并没有解离的作用。解离液的作用是使细胞分散开,便于观察。在高中课本有丝分裂的实验中,解离液的酒精其实就有固定的作用,我想这是为了简化实验程序,因为不经过单独的固定步骤,实验结果也是比较理想的。如果你在大学再做这个实验,就会有固定这一步了,固定之后还要解离。

本文转载自细胞内外《【引用】卡诺氏液与解离液的区别》

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