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关于甲基绿的使用  

2014-08-01 21:12:04|  分类: 默认分类 |  标签: |举报 |字号 订阅

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1、为什么不能用甲基绿鉴定提纯的DNA?
          原因可能是甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色,而且是在常温下进行的反应,对于聚合程度低的DNA则不容易结合;而二苯胺与DNA相遇会变成蓝色的原理是:DNA在酸性条件下加热,其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断裂,生成嘌呤碱、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸,而2-脱氧核糖在酸性环境中加热脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊糖,与二苯胺试剂反应生成蓝色物质,这一反应的条件是在沸水浴环境下进行的。显然甲基绿和二苯胺与DNA进行的颜色反应的原理和反应的条件是不一样的,而对于提纯了的DNA,更适合用二苯胺在沸水浴条件下进行检测。 
2、为什么甲基绿和吡罗红要混合使用,且要现配现用?
          原因是甲基绿—吡罗红为碱性染料,它们分别能与细胞内的DNA、RNA结合呈现不同颜色。当甲基绿与吡罗红作为混合染料时,甲基绿与染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色;吡罗红与核仁、细胞质中的RNA选择性结合显示红色。 这两种染料在混合染液中有竞争作用,两种核酸分子都是多聚体,只是聚合程度有所不同。甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色,而吡罗红则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色(但解聚的DNA也能和吡罗红结合呈现红色)。即RNA对吡罗红亲和力大,被染成红色,而DNA对甲基绿亲和力大,被染成绿色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色,可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。
         配制好的吡罗红甲基绿溶液易氧化,且在光照下氧化加剧,所以最好现配现用。若是配制完用不了,应避光保存,故在棕色试剂瓶中保存。
3、二苯胺与甲基绿能否混用
          这是用于鉴定DNA的存在的两种试剂,二苯胺加热法中,呈现蓝色反应。用甲基绿溶液直接滴在有DNA丝状物的载玻片或玻棒上,用水充分冲洗掉浮色后再观察,呈蓝绿色反应。只用一种即可,不混合用。前者要加热,后者不加热。
4、两者都可以和DNA反应,应该怎样区分它们呢
          甲基绿甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状,能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基绿是最有价值的细胞和染色剂,细胞学上常用来染染色质,跟酸性品红一起可作植物木质部的染色剂
5、甲基绿与二苯胺对于鉴定DNA的区别
         DNA粗提取与鉴定这个实验,DNA鉴定则换成用二苯胺,在这个DNA粗提取过程中,用改变氯化钠浓度办法将蛋白质与DNA分开,用冷酒精处理进一步将DNA与RNA、蛋白质分开。一系列的操作就是要获得纯度较高的DNA,最后获得的纯度较高的DNA不能排除有RNA,所以此时用甲基绿鉴定DNA、RNA都被染成绿色,所以不能说绿色一定是DNA。而改用二苯胺就不一样了,DNA和二苯胺反应的产物成蓝色,RNA则没有这种颜色反应,所以用二苯胺鉴定呈蓝色的一定是DNA,并且蓝色深浅与DNA含量高低有关。
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