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例析限制酶识别序列的方向性  

2014-03-30 17:57:21|  分类: 现代科技专题 |  标签: |举报 |字号 订阅

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例题限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—,限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点,在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。
②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。
③在DNA连接酶的作用下,上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来?为什么?
参考答案
例析限制酶识别序列的方向性 - 生物清风岭 - 高中生物,生物教学|生物清风岭
 
③可以连接。因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的(或是可以互补的)。
网友“人生如梦”质疑】目的基因所在的DNA序列如果是这样:
例析限制酶识别序列的方向性 - 生物清风岭 - 高中生物,生物教学|生物清风岭
此时得到的目的基因与质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端是无法进行碱基配对的。这种情况为什么又不会出现呢?
解析】众所周知,DNA分子的两条脱氧核苷酸长链是反向平行的,一条链是5’→3’方向,另一条是3’→5’方向。在一般表示DNA分子碱基序列的图中,上边一条链是5’→3’方向,下边一条是3’→5’方向。限制性内切酶的识别序列也是有方向性的,通常写出的限制酶的识别序列是专指5’→3’那条链上的碱基序列。在上面的例题中,限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点就是5’—G↓GATCC—3’,限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是5’—↓GATC—3’。所以“人生如梦”画的图中,目的基因所在的DNA序列,只有左边具有一个限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点,右边的那个序列是5’—CTAG—3’,不能被限制性内切酶Ⅱ识别和切割,因此“人生如梦”设想的那种情况不会出现。
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