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获取胚胎干细胞的方法  

2013-04-28 21:04:42|  分类: 现代科技专题 |  标签: |举报 |字号 订阅

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建立胚胎干细胞系的胚胎有以下几种:  

1、经典的囊胚法

将受精卵培养至囊胚阶段,从囊胚中分离培养内细胞团,进一步培养增殖ICM,扩大培养后即得到ES细胞系。 特点:技术成熟,所得到的ES细胞系不经过任何修饰,最接近自然状态。 

 2、核转移细胞法

首先将卵母细胞脱核,然后将体细胞的细胞核转移到去核卵细胞中,再将这种经核转移处理的卵细胞进行体外培养,待囊胚形成后分离、培养其内细胞团,获得ES细胞系。 特点: 获得的是携带特定个体遗传物质的胚胎干细胞,是治疗性克隆的珍贵细胞资源。 

 3、改进的核转移法

先将成纤维细胞的Cdx2 基因条件RNAi,将Cdx2 基因knock-down的细胞核转移到去核卵细胞,再将这种经核转移处理的卵细胞进行体外培养,形成囊胚,由于Cdx2 基因knock-down,囊胚不可能着床发育成个体,从这个囊胚分离、培养其内细胞团,获得ES细胞系。获得的ES细胞可以瞬转质粒cre将Cdx2 基因RNAi片段剪切掉,从而获得Cdx2 基因表达正常的ES细胞系。 特点:Cdx2 基因knock-down的囊胚不可能着床发育成个体,避免伦理上的争议。

 4、单个分裂球来源胚胎干细胞法

将受精卵培养至八细胞状态,取出其中一个分裂球和其他荧光标记的胚胎干细胞共培养,而其他七细胞可正常发育至囊胚,直至正常个体。共培养的胚胎干细胞扩增后,筛选出没有荧光标记的胚胎干细胞,继续培养,得到目标ES细胞系。 特点:建立胚胎干细胞系时,避免破坏一个胚胎,避免伦理上的争议

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